TRABAJO PRÁCTICO N° 8
(LIC. EN BIOTECNOLOGÍA)
TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
MODALIDAD: PRÁCTICO DE LABORATORIO
Temario
teórico: Tecnología del ADN recombinante. Enzimas:
endonucleasas de restricción (tipos, nomenclatura, protección por metilación), fosfatasas,
quinasas, ADN ligasas, ADN polimerasa I. Vectores de clonado. Vectores
derivados de plásmidos (tipos). Vectores derivados de bacteriófagos. Vectores combinados de plásmidos
y fagos. Cósmicos. Fásmidos. Cromosomas artificiales. Estrategias para clonar un fragmento de ADN en un vector plasmídico. Inserción del fragmento de ADN en un gen de resistencia
del vector. Inserción del fragmento de ADN en el gen lacZ del vector. Defosforilación. Clonado direccional.
Introducción de información
genética en las bacterias.
Protocolos Básicos: Preparación de células competentes de Escherichia coli JM109. Transformación. Expresión de ADN exógeno en
bacterias. Control de la expresión génica en procariotas y eucariotas.
Expresión de genes eucariotas en bacterias: intrones, promotores, sitio de
unión al ribosoma.
Transformación de células competentes con plásmido recombinante: Se
realizará la transformación por shock térmico de células competentes de E. coli DH5 con un vector de clonado recombinante. Se
sembrarán las bacterias en medio LB agar conteniendo el antibiótico ampicilina
para la selección de los clones transformados.
Material de estudio: Libro Conceptos Teóricos y Prácticos para el
estudio de Células y Biomoléculas: Capítulo 8 ¨Tecnología del ADN recombinante¨
(páginas 137-154). Libro Biología Molecular y Biotecnología de J. M. Walker y E.
B. Gingold. Capítulo 4 ¨La expresión del DNA exógeno en bacterias¨ (páginas
67-79).
El material de estudio estará disponible en focopiadora a partir del 30/10/12
